2022113715670一种检测球孢子菌的特异引物对及其检测方法.pdf

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN115992286A
(43)申请公布日2023.04.21
(21)申请号202211371567.0

(22)申请日2022.11.03
(71)申请人中国医学科学院皮肤病医院（中国
医学科学院皮肤病研究所）
地址210042江苏省南京市玄武区太平门
外蒋王庙街14号
(72)发明人梅嬛梁官钊刘维达
(74)专利代理机构南京天翼专利代理有限责任
公司32112
专利代理师赵青霞
(51)Int.Cl.
C12Q1/6895(2018.01)
C12Q1/686(2018.01)
C12N15/11(2006.01)
C12R1/645(2006.01)权利要求书1页说明书7页
序列表（电子公布）附图1页
(54)发明名称
一种检测球孢子菌的特异引物对及其检测
方法
(57)摘要
本发明公开了一种检测球孢子菌的特异性
引物对及其检测方法，属于微生物菌检测技术领
域。本发明公开的特异性引物对包括三组正向引
物和反向引物，采用任意一组特异性引物对，对
样品DNA进行PCR扩增，扩增后对PCR产物进行电
泳条带检测分析，即可准确检测球孢子菌。本发
明的检测方法具有检测快速、特异性强、操作便
捷、鉴定准确的优点，克服了传统方法的时效性
差、实验室传播风险及假阴性的问题。
CN115992286A
CN115992286A权利要求书1/1页

1.一种检测球孢子菌的特异性引物对，其特征在于，包括如下三组正向引物和反向引
物：
(1)第一组
DS268114.1_s5911‑F：GCCAACACTGTTAGCGAGTG
DS268114.1_s5911‑R：GGACATCGGAGTGTGGATCC；
(2)第二组
DS268113.1_s3787‑F：ACTCTGGCGCATATGGTGAC
DS268113.1_s3787‑R：GTTCAGCTTGCCTGTTACGC；
(3)第三组
DS268112.1_s6397‑F：TTGCCTCAGTGCTATCCTCG
DS268112.1_s6397‑R：AGGCAGACCATCATGTTGCA。
2.一种球孢子菌的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取待测样品中真菌的DNA；
(2)采用权利要求1所述的任意一组特异性引物对，对步骤(1)获得的样品DNA进行PCR
扩增；
(3)扩增后对PCR产物进行电泳条带检测分析。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系如下：

4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增程序为：
(a)95℃预变性5min；
(b)(95℃变性30s；55℃退火30s；72℃延伸45s)×35循环
(c)72℃总延伸10min。

2
CN115992286A说明书1/7页

一种检测球孢子菌的特异引物对及其检测方法

技术领域
[0001]本发明属于微生物菌检测技术领域，具体涉及一种检测球孢子菌的特异引物对及
其检测方法。

背景技术
[0002]根据卫生部2006版《人间传染的病原微生物名录》显示，球孢子菌属
(Coccidioidesspp)包括粗球孢子菌(C.immitis)和波萨达斯球孢子菌(C.posadasii)，为
生物危害程度3类的高致病性病原真菌，多流行于北美地区。其中C.immitis的分布局限于
加利福尼亚州，而C.posadasii则多流行于美国亚利桑那州南部和西部、德克萨斯州、犹他
州及墨西哥等地区，分布更为广泛。(参见吴吉芹，朱利平.球孢子菌病的流行病学、临床表
现及诊治进展，微生物与感染，2017年2月25日，12(1)：44‑49)在临床上，粗球孢子菌
(C.immitis)和波萨达斯球孢子菌(C.posadasii)无论是形态特征还是致病性都十分相似，
一般不加以细分，引起的感染统称为球孢子菌病。两者均可引起患者严重的呼吸系统感染，
而在免疫受损人群中，更容易引发播散性感染，治愈过程复杂且容易导致死亡(参见
SaubolleMAetal.MulticenterClinicalValidationofaCartridge‑BasedReal‑
TimePCRSystemforDetectionofCoccidioidesspp.inLowerRespiratory
Specimens.JClinMicrobiol56:e01277)；另外，由于球孢子菌可以长期存在于碱性干旱
土壤中，以菌丝相和关节孢子形式寄生于环境中。一旦出现土壤翻动或风沙等因素，即引起
大量关节孢子散播，就造成人群吸入式感染。(参见ThomasJ.Sharpton,JasonE.Stajich,
StevenD.Rounsle