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(19)国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号CN115992286A (43)申请公布日2023.04.21 (21)申请号202211371567.0 (22)申请日2022.11.03 (71)申请人中国医学科学院皮肤病医院(中国 医学科学院皮肤病研究所) 地址210042江苏省南京市玄武区太平门 外蒋王庙街14号 (72)发明人梅嬛梁官钊刘维达 (74)专利代理机构南京天翼专利代理有限责任 公司32112 专利代理师赵青霞 (51)Int.Cl. C12Q1/6895(2018.01) C12Q1/686(2018.01) C12N15/11(2006.01) C12R1/645(2006.01)权利要求书1页说明书7页 序列表(电子公布)附图1页 (54)发明名称 一种检测球孢子菌的特异引物对及其检测 方法 (57)摘要 本发明公开了一种检测球孢子菌的特异性 引物对及其检测方法,属于微生物菌检测技术领 域。本发明公开的特异性引物对包括三组正向引 物和反向引物,采用任意一组特异性引物对,对 样品DNA进行PCR扩增,扩增后对PCR产物进行电 泳条带检测分析,即可准确检测球孢子菌。本发 明的检测方法具有检测快速、特异性强、操作便 捷、鉴定准确的优点,克服了传统方法的时效性 差、实验室传播风险及假阴性的问题。 CN115992286A CN115992286A权利要求书1/1页 1.一种检测球孢子菌的特异性引物对,其特征在于,包括如下三组正向引物和反向引 物: (1)第一组 DS268114.1_s5911‑F:GCCAACACTGTTAGCGAGTG DS268114.1_s5911‑R:GGACATCGGAGTGTGGATCC; (2)第二组 DS268113.1_s3787‑F:ACTCTGGCGCATATGGTGAC DS268113.1_s3787‑R:GTTCAGCTTGCCTGTTACGC; (3)第三组 DS268112.1_s6397‑F:TTGCCTCAGTGCTATCCTCG DS268112.1_s6397‑R:AGGCAGACCATCATGTTGCA。 2.一种球孢子菌的检测方法,其特征在于,包括如下步骤: (1)提取待测样品中真菌的DNA; (2)采用权利要求1所述的任意一组特异性引物对,对步骤(1)获得的样品DNA进行PCR 扩增; (3)扩增后对PCR产物进行电泳条带检测分析。 3.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于,所述PCR扩增的反应体系如下: 4.根据权利要求2所述的检测方法,其特征在于,所述PCR扩增程序为: (a)95℃预变性5min; (b)(95℃变性30s;55℃退火30s;72℃延伸45s)×35循环 (c)72℃总延伸10min。 2 CN115992286A说明书1/7页 一种检测球孢子菌的特异引物对及其检测方法 技术领域 [0001]本发明属于微生物菌检测技术领域,具体涉及一种检测球孢子菌的特异引物对及 其检测方法。 背景技术 [0002]根据卫生部2006版《人间传染的病原微生物名录》显示,球孢子菌属 (Coccidioidesspp)包括粗球孢子菌(C.immitis)和波萨达斯球孢子菌(C.posadasii),为 生物危害程度3类的高致病性病原真菌,多流行于北美地区。其中C.immitis的分布局限于 加利福尼亚州,而C.posadasii则多流行于美国亚利桑那州南部和西部、德克萨斯州、犹他 州及墨西哥等地区,分布更为广泛。(参见吴吉芹,朱利平.球孢子菌病的流行病学、临床表 现及诊治进展,微生物与感染,2017年2月25日,12(1):44‑49)在临床上,粗球孢子菌 (C.immitis)和波萨达斯球孢子菌(C.posadasii)无论是形态特征还是致病性都十分相似, 一般不加以细分,引起的感染统称为球孢子菌病。两者均可引起患者严重的呼吸系统感染, 而在免疫受损人群中,更容易引发播散性感染,治愈过程复杂且容易导致死亡(参见 SaubolleMAetal.MulticenterClinicalValidationofaCartridge‑BasedReal‑ TimePCRSystemforDetectionofCoccidioidesspp.inLowerRespiratory Specimens.JClinMicrobiol56:e01277);另外,由于球孢子菌可以长期存在于碱性干旱 土壤中,以菌丝相和关节孢子形式寄生于环境中。一旦出现土壤翻动或风沙等因素,即引起 大量关节孢子散播,就造成人群吸入式感染。(参见ThomasJ.Sharpton,JasonE.Stajich, StevenD.Rounsle
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