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(19)国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号CN117050893A (43)申请公布日2023.11.14 (21)申请号202310534596.2(51)Int.Cl. (22)申请日2023.05.12C12N1/19(2006.01) C12N15/60(2006.01) (66)本国优先权数据C12N15/53(2006.01) 202210520903.72022.05.12CNC12N15/31(2006.01) (83)生物保藏信息C12N15/81(2006.01) CGMCCNO.208852020.10.14C12P7/56(2006.01) (71)申请人中国科学院天津工业生物技术研究C12R1/84(2006.01) 所 地址300308天津市东丽区空港经济区西 七道32号 (72)发明人张学礼樊飞宇郗永岩徐洪涛 (74)专利代理机构北京永新同创知识产权代理 有限公司11376 专利代理师栾星明崔依同 权利要求书4页说明书29页 序列表(电子公布) (54)发明名称 一种高产乳酸的耐酸酵母菌株及其构建方 法和应用 (57)摘要 本发明提供了一种经遗传改造的乳酸生产 酵母菌株、其制备方法以及使用其生产乳酸的方 法和应用,其中所述乳酸生产酵母菌株具有或具 有增强的L‑乳酸脱氢酶活性或D‑乳酸脱氢酶活 性以及具有或具有增强的单羧酸透性酶活性。 CN117050893A CN117050893A权利要求书1/4页 1.一种经遗传改造的乳酸生产酵母菌株,其 (1)具有或具有增强的L‑乳酸脱氢酶(EC1.1.1.27)活性或D‑乳酸脱氢酶(EC 1.1.1.28)活性;以及 (2)具有或具有增强的单羧酸透性酶活性,其中所述单羧酸透性酶包含SEQIDNO:10 或SEQIDNO:11所示序列编码的氨基酸序列或与其具有至少75%、80%、85%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同性且编码单羧酸透性酶活性的氨 基酸序列, 任选地,还具有降低活性的或失活的丙酮酸脱羧酶(EC4.1.1.43)和/或NAD+依赖性3‑ 磷酸甘油脱氢酶(EC1.1.1.8), 优选地,所述L‑乳酸脱氢酶选自来自如下的L‑乳酸脱氢酶:乳球菌属(Lactococcus)、 肠球菌属(Enterococcus)、链球菌属(Streptococcus)、片球菌属(Pediococcus)、I型乳杆 菌(Lactobacillus)、牛(Bostaurus)、中华鳖(Pelodiscussinensis)和米曲霉 (Aspergillusoryzae);更优选地,所述L‑乳酸脱氢酶是牛L‑乳酸脱氢酶,更优选地,所述 L‑乳酸脱氢酶包含SEQIDNO:3编码的氨基酸序列或与其具有至少75%、80%、85%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同性且编码具有L‑乳酸脱氢 酶活性的氨基酸序列; 优选地,所述D‑乳酸脱氢酶选自来自如下的D‑乳酸脱氢酶:大肠杆菌(Escherichia coli)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)和美洲鲎(Limuluspolyphemus),更优选 地,所述D‑乳酸脱氢酶是植物乳杆菌D‑乳酸脱氢酶,更优选地,所述D‑乳酸脱氢酶包含SEQ IDNO:4编码的氨基酸序列或与其具有至少75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99%或更高相同性且编码具有D‑乳酸脱氢酶活性的氨基酸序列, 优选地,所述单羧酸透性酶包含SEQIDNO:10所示序列编码的氨基酸序列或与其具有 至少75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相 同性且编码单羧酸透性酶活性的氨基酸序列。 2.权利要求1的经遗传改造的乳酸生产酵母菌株,其还具有降低活性的或失活的: (i)二羧酸转运蛋白,和/或 (ii)核黄素转运蛋白。 3.权利要求1或2的经遗传改造的乳酸生产酵母菌株,其中所述经遗传改造的乳酸生产 酵母菌株: (1)具有或具有增强的所述L‑乳酸脱氢酶活性和所述单羧酸透性酶活性以及具有降低 活性的或失活的L‑乳酸细胞色素c氧化还原酶(EC1.1.2.3),优选地,所述编码L‑乳酸细胞 色素c氧化还原酶的核酸序列包含SEQIDNO:17所示序列或其简并序列,或与其具有至少 75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高相同性 且编码具有L‑乳酸细胞色素c氧化还原酶活性的氨基酸序列的核苷酸序列;或 (2)具有或具有增强的所述D‑
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