2023105345962一种高产乳酸的耐酸酵母菌株及其构建方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN117050893A
(43)申请公布日2023.11.14
(21)申请号202310534596.2(51)Int.Cl.
(22)申请日2023.05.12C12N1/19(2006.01)
C12N15/60(2006.01)
(66)本国优先权数据C12N15/53(2006.01)
202210520903.72022.05.12CNC12N15/31(2006.01)
(83)生物保藏信息C12N15/81(2006.01)
CGMCCNO.208852020.10.14C12P7/56(2006.01)
(71)申请人中国科学院天津工业生物技术研究C12R1/84(2006.01)
所
地址300308天津市东丽区空港经济区西
七道32号
(72)发明人张学礼樊飞宇郗永岩徐洪涛
(74)专利代理机构北京永新同创知识产权代理
有限公司11376
专利代理师栾星明崔依同
权利要求书4页说明书29页
序列表（电子公布）
(54)发明名称
一种高产乳酸的耐酸酵母菌株及其构建方
法和应用
(57)摘要
本发明提供了一种经遗传改造的乳酸生产
酵母菌株、其制备方法以及使用其生产乳酸的方
法和应用，其中所述乳酸生产酵母菌株具有或具
有增强的L‑乳酸脱氢酶活性或D‑乳酸脱氢酶活
性以及具有或具有增强的单羧酸透性酶活性。
CN117050893A
CN117050893A权利要求书1/4页

1.一种经遗传改造的乳酸生产酵母菌株，其
(1)具有或具有增强的L‑乳酸脱氢酶(EC1.1.1.27)活性或D‑乳酸脱氢酶(EC
1.1.1.28)活性；以及
(2)具有或具有增强的单羧酸透性酶活性，其中所述单羧酸透性酶包含SEQIDNO：10
或SEQIDNO：11所示序列编码的氨基酸序列或与其具有至少75％、80％、85％、90％、91％、
92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高相同性且编码单羧酸透性酶活性的氨
基酸序列，
任选地，还具有降低活性的或失活的丙酮酸脱羧酶(EC4.1.1.43)和/或NAD+依赖性3‑
磷酸甘油脱氢酶(EC1.1.1.8)，
优选地，所述L‑乳酸脱氢酶选自来自如下的L‑乳酸脱氢酶：乳球菌属(Lactococcus)、
肠球菌属(Enterococcus)、链球菌属(Streptococcus)、片球菌属(Pediococcus)、I型乳杆
菌(Lactobacillus)、牛(Bostaurus)、中华鳖(Pelodiscussinensis)和米曲霉
(Aspergillusoryzae)；更优选地，所述L‑乳酸脱氢酶是牛L‑乳酸脱氢酶，更优选地，所述
L‑乳酸脱氢酶包含SEQIDNO：3编码的氨基酸序列或与其具有至少75％、80％、85％、90％、
91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高相同性且编码具有L‑乳酸脱氢
酶活性的氨基酸序列；
优选地，所述D‑乳酸脱氢酶选自来自如下的D‑乳酸脱氢酶：大肠杆菌(Escherichia
coli)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)和美洲鲎(Limuluspolyphemus)，更优选
地，所述D‑乳酸脱氢酶是植物乳杆菌D‑乳酸脱氢酶，更优选地，所述D‑乳酸脱氢酶包含SEQ
IDNO：4编码的氨基酸序列或与其具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、
95％、96％、97％、98％、99％或更高相同性且编码具有D‑乳酸脱氢酶活性的氨基酸序列，
优选地，所述单羧酸透性酶包含SEQIDNO：10所示序列编码的氨基酸序列或与其具有
至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高相
同性且编码单羧酸透性酶活性的氨基酸序列。
2.权利要求1的经遗传改造的乳酸生产酵母菌株，其还具有降低活性的或失活的：
(i)二羧酸转运蛋白，和/或
(ii)核黄素转运蛋白。
3.权利要求1或2的经遗传改造的乳酸生产酵母菌株，其中所述经遗传改造的乳酸生产
酵母菌株：
(1)具有或具有增强的所述L‑乳酸脱氢酶活性和所述单羧酸透性酶活性以及具有降低
活性的或失活的L‑乳酸细胞色素c氧化还原酶(EC1.1.2.3)，优选地，所述编码L‑乳酸细胞
色素c氧化还原酶的核酸序列包含SEQIDNO：17所示序列或其简并序列，或与其具有至少
75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高相同性
且编码具有L‑乳酸细胞色素c氧化还原酶活性的氨基酸序列的核苷酸序列；或
(2)具有或具有增强的所述D‑