2021111603411一种提高杂交瘤细胞存活率的营养补充剂,培养基及培养方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN113755449A
(43)申请公布日2021.12.07
(21)申请号202111160341.1
(22)申请日2021.09.30
(71)申请人南京天纵易康生物科技股份有限公
司
地址210000江苏省南京市江北新区星座
路88号
(72)发明人徐林金玉鲁锦标戴超
(74)专利代理机构南京创略知识产权代理事务
所(普通合伙)32358
代理人王剑
(51)Int.Cl.
C12N5/20(2006.01)

权利要求书1页说明书7页附图5页
(54)发明名称
一种提高杂交瘤细胞存活率的营养补充剂、
培养基及培养方法
(57)摘要
本发明公开一种提高杂交瘤细胞存活率的
营养补充剂、培养基及培养方法，所述营养补充
剂的组分包括丙酮酸钠、白细胞介素6和人胰岛
素；将其加入主体组分包括DMEM、胎牛血清、谷氨
酰胺和HT培养基添加剂的培养基中对杂交瘤细
胞进行培养，以提高杂交瘤细胞的存活率。在使
用含该营养补充剂的培养基进行杂交瘤细胞培
养时，先将人胰岛素加入培养基主体，再在杂交
瘤细胞对数期加入丙酮酸钠和白细胞介素6的混
合物，刺激增殖，从而代替昂贵的血清及或高血
清浓度的方式提高杂交瘤细胞的存活率。本发明
营养补充剂不对杂交瘤细胞单克隆抗体的生产
产生干扰，并达到控制成本的目的，具有良好的
经济效益及应用前景。
CN113755449A
CN113755449A权利要求书1/1页

1.一种提高杂交瘤细胞存活率的营养补充剂，其特征在于：该营养补充剂用于添加到
培养杂交瘤细胞的培养基中以提高杂交瘤细胞的存活率，其组分包括丙酮酸钠、白细胞介
素6和人胰岛素。
2.根据权利要求1所述的提高杂交瘤细胞存活率的营养补充剂，其特征在于：所述营养
补充剂的加入量为：每升培养基添加丙酮酸钠0.1～200mg，白细胞介素60.1～200ng，人胰
岛素0.1～10mg。
3.根据权利要求2所述的提高杂交瘤细胞存活率的营养补充剂，其特征在于：每升培养
基中丙酮酸钠添加量为10～100mg，白细胞介素6添加量为10～100ng，人胰岛素添加量为
0.5～5mg。
4.根据权利要求3所述的提高杂交瘤细胞存活率的营养补充剂，其特征在于：每升培养
基中丙酮酸钠添加量为50mg，白细胞介素6添加量为50ng，人胰岛素添加量为2mg。
5.一种提高杂交瘤细胞存活率的培养基，其特征在于：该培养基包括培养基主体和权
利要求1～4任意一项所述的营养补充剂；所述培养基主体的组分包括DMEM、胎牛血清、谷氨
酰胺和HT培养基添加剂。
6.根据权利要求5所述的提高杂交瘤细胞存活率的培养基，其特征在于：所述DMEM占培
养基主体总质量的80～85%wt，所述胎牛血清占培养基主体总质量的10～15%wt。
7.一种提高杂交瘤细胞存活率的培养方法，其特征在于：使用权利要求5或6所述的培
养基进行培养，包括以下步骤：
（1）复苏培养：将冻存的杂交瘤细胞复溶后接种于培养基主体中进行复苏培养，获得复
苏的杂交瘤细胞；
（2）活化培养：将复苏的杂交瘤细胞接种到含有人胰岛素的培养基主体中，进行活化培
养，为细胞分裂生长做好前期准备；
（3）增殖培养：在杂交瘤细胞活化培养一定时间后，向培养基主体中加入白细胞介素6
和丙酮酸钠的混合物，继续培养，刺激杂交瘤细胞增殖；
（4）传代培养：将增殖培养杂交瘤细胞转接到含有营养补充剂的全培养基上进行传代
培养。
8.根据权利要求7所述的提高杂交瘤细胞存活率的培养方法，其特征在于：步骤（1）至

步骤（4）的培养条件均为：温度37℃，CO2浓度为5%。
9.根据权利要求7所述的提高杂交瘤细胞存活率的培养方法，其特征在于：步骤（3）中，
在杂交瘤细胞活化培养12h时，向培养基主体中加入白细胞介素6和丙酮酸钠的混合物。
10.根据权利要求7所述的提高杂交瘤细胞存活率的培养方法，其特征在于：步骤（3）
中，在杂交瘤细胞活化培养4h和12h时，分别向培养基主体中加入白细胞介素6和丙酮酸钠
的混合物，且两次加入的混合物体积比为1:9。

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CN113755449A说明书1/7页

一种提高杂交瘤细胞存活率的营养补充剂、培养基及培养
方法

技术领域
[0001]本发明涉及一种提高杂交瘤细胞存活率的营养补充剂、培养基及培养方法。

背景技术
[0002]杂交瘤细胞培养技术实现了单克隆抗体的生产，并为抗体的免疫学诊断提供了各
种各样的抗体试剂。但通过免疫淋巴细胞(免疫B淋巴细胞)和骨髓瘤细胞融合得到的杂交
瘤细胞，在融合时细胞本就受到损伤，再加上后期的传代、冻存、复苏过程中不同程度的进
一步损伤，会导致一些杂交瘤细胞在培养过程中出现细胞存活率、抗体产量明显降低