CN2021115340097一种脂溶性维生素A,D,E的检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN114280177A
(43)申请公布日2022.04.05
(21)申请号202111534009.7
(22)申请日2021.12.15
(71)申请人上海市徐汇区中心医院
地址200031上海市徐汇区淮海中路966号
(72)发明人陆优丽梁艳茅晓寅张美微
姜凤丽李水军刘罡一余琛
杨双双贺娟
(74)专利代理机构上海申浩律师事务所31280
代理人沈其梅
(51)Int.Cl.
G01N30/02(2006.01)
G01N30/06(2006.01)
G01N30/14(2006.01)
G01N30/72(2006.01)

权利要求书1页说明书5页附图2页
(54)发明名称
一种脂溶性维生素A、D、E的检测方法
(57)摘要
本发明提供一种脂溶性维生素A、25羟基维
生素D、E的检测方法，所述检测方法包括以下步
骤：(1)取血液样品进行蛋白沉淀，过滤得上清
液；(2)步骤(1)的上清液中加入2‑亚硝基吡啶的
衍生化试剂进行衍生化反应；(3)衍生化反应终
止后，稀释反应液，通过液相色谱‑串联质谱仪测
定脂溶性维生素A、25羟基维生素D、E的浓度。本
发明衍生化步骤快速、简便；能够快速、准确、可
重现的同时检测维生素A、25羟基维生素D和维生
素E，具有分析时间短，灵敏度高、可实现高通量
检测和自动检测。
CN114280177A
CN114280177A权利要求书1/1页

1.一种脂溶性维生素A、D、E的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
(1)取血液样品进行蛋白沉淀，过滤得上清液；
(2)步骤(1)的上清液中加入2‑亚硝基吡啶的衍生化试剂进行衍生化反应；
(3)衍生化反应终止后，稀释反应液，通过液相色谱‑串联质谱仪测定脂溶性维生素A、
25羟基维生素D、E的浓度。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中所述血液样品为血浆或
血清。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中沉淀剂中包括以下同位

素内标：VA‑d6,25‑OHVD2‑d6,25‑OHVD3‑d6,VE‑d6。
4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述沉淀剂为甲醇、乙醇、乙腈或二种以
上组分的混合物的水溶液。
5.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述沉淀剂为纯甲醇。
6.如权利要求1‑5任一权利要求所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中衍生化
反应时间为10‑20分钟，所述2‑亚硝基吡啶摩尔浓度为5‑50mM，pH1‑3。
7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱条件为流动相A：0.1‑
0.5％甲酸或者乙酸水溶液和流动相B：0.1‑0.5％甲酸或者乙酸甲醇溶液,使用梯度洗脱法
洗脱获得待测样品,柱温：室温；流速：0.5‑0.7mL/min；进样量：10‑30μL；进样时间：5min。
8.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中加入2‑亚硝基吡啶的衍
生化试剂后，涡旋混匀1分钟，放置室温衍生化反应15min。
9.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中加入2‑亚硝基吡啶的衍
生化试剂后，涡旋混匀1分钟，放置室温衍生化反应15min。
10.如权利要求7‑9任一权利要求所述的检测方法，其特征在于，所述串联质谱条件为:
电喷雾离子源:正离子扫描；气帘气:30psi；碰撞气:12psi；雾化气:70psi；加热气:60psi；
离子源电压:5500V；离子源温度:550℃，MRM多反应监测扫描分析。

2
CN114280177A说明书1/5页

一种脂溶性维生素A、D、E的检测方法

技术领域
[0001]本发明涉及生物医药领域，具体的涉及脂溶性维生素的检测方法。

背景技术
[0002]脂溶性维生素是仅由碳、氢、氧三元素组成的不溶于水而溶于脂肪及非极性有机
溶剂的一类有机物质。这类维生素在食物中多与脂质共存，可随脂质吸收进入人体并在体
内储存。脂溶性维生素摄入量过多易引起中毒现象，如关节疼痛、皮肤干燥、恶心呕吐甚至
厌食，摄入量过少则导致一些生理上的疾病，如新生儿会引起贫血症；儿童易患小儿佝偻
病；成人易引起软骨病和夜盲症等。视黄醇(VA)具有维持正常视力、促进生长发育、增加机
体对传染病的抵抗力、预防和治疗干眼病等作用；缺乏时可引起夜盲症、角膜干燥症、皮肤
干燥、脱屑等疾病。维生素D是一族具有抗佝偻病活性的脂溶性类固醇衍生物，其中25‑羟基

维生素D2和25‑羟基维生素D3为维生素D在体内的储存形式，维生素D对机体有营养意义，能
调节人体内钙和磷的代谢，促进吸收利用，促进骨骼成长，缺乏时可引起佝偻症(青少年)、
软骨症(成年)、骨