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(19)国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号CN116656520A (43)申请公布日2023.08.29 (21)申请号202310853228.4C12N15/55(2006.01) (22)申请日2023.07.12C12P23/00(2006.01) C12R1/645(2006.01) (83)生物保藏信息 CCTCCNO:M202311832023.07.05 (71)申请人华东理工大学 地址200237上海市徐汇区梅陇路130号 (72)发明人花强刘枫陈骏 (74)专利代理机构南京理工大学专利中心 32203 专利代理师刘海霞 (51)Int.Cl. C12N1/19(2006.01) C12N15/81(2006.01) C12N15/53(2006.01) 权利要求书1页说明书7页 C12N15/54(2006.01) 序列表(电子公布)附图3页 (54)发明名称 解脂耶氏酵母基因工程菌及其在β-胡萝卜 素生产中的应用 (57)摘要 本发明公开了一种解脂耶氏酵母基因工程 菌及其在β‑胡萝卜素生产中的应用。本发明从 自然界高含油脂的环境中分离筛选获得产胞内 油脂的野生型解脂耶氏酵母菌株,再以此为出发 菌株,经紫外诱变,获得一株胞内油脂合成能力 显著增强的突变株,然后将卷枝毛霉来源的 carB、carRP和解脂耶氏酵母内源的GGPPS表达盒 以多拷贝形式定点整合到突变株SBT的rDNA位 点,获得一株高拷贝且能生产β‑胡萝卜素的基 因工程菌SBT04‑015,最后对基因工程菌SBT04‑ 015中的磷酸酶yl_PP基因进行定点敲除,获得能 够积累较高胞内油脂且高效生产β‑胡萝卜素的 解脂耶氏酵母基因工程菌SBT04‑016。 CN116656520A CN116656520A权利要求书1/1页 1.解脂耶氏酵母基因工程菌SBT04‑016,保藏编号为CCTCCNO:M20231183。 2.权利要求1所述的解脂耶氏酵母基因工程菌SBT04‑016的培养方法,其特征在于,具 体步骤如下: 将解脂耶氏酵母基因工程菌SBT04‑016接种至发酵培养基中,所述的发酵培养基的碳 源为甘油或葡萄糖。 3.根据权利要求2所述的培养方法,其特征在于,所述的发酵培养基的组成为:葡萄糖 20g/L、酵母提取物20g/L、胰蛋白胨10g/L、pH5‑6,或为:甘油100g/L、酵母提取物20g/ L、胰蛋白胨10g/L、pH5‑6。 4.权利要求1所述的解脂耶氏酵母基因工程菌SBT04‑016在发酵生产β‑胡萝卜素中的 应用。 5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,具体应用方法为:将解脂耶氏酵母基因工 程菌SBT04‑016接种至发酵培养基中,发酵结束后,离心获取菌体,破碎细胞后利用丙酮萃 取β‑胡萝卜素。 6.提高解脂耶氏酵母类胡萝卜素产量的方法,其特征在于,定点敲除产类胡萝卜素的 解脂耶氏酵母中的yl_PP基因,所述的yl_PP基因的核苷酸序列如SEQNo.37所示。 7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,类胡萝卜素为β‑胡萝卜素、番茄红素、玉米 黄质、叶黄素、虾青素、西红花苷、角黄素或海胆酮。 2 CN116656520A说明书1/7页 解脂耶氏酵母基因工程菌及其在β‑胡萝卜素生产中的应用 技术领域 [0001]本发明属于基因工程菌领域,涉及一种解脂耶氏酵母基因工程菌及其在β‑胡萝卜 素生产中的应用。 背景技术 [0002]β‑胡萝卜素是一种含有8个异戊二烯单元的四萜类化合物,是一种橘黄色的脂溶 性化合物,属于胡萝卜素或类胡萝卜素家族的一员,广泛存在于众多天然植物中,如红薯、 胡萝卜、木瓜、芒果等。β‑胡萝卜素不仅能作为人体合成维生素A的前体,而且对提高免疫 力、延缓衰老及抑制癌细胞的增殖等方面都有重要作用。藻类是目前生产β‑胡萝卜素的重 要来源之一,如佛氏绿胶藻Chloroglocafrisschi、泥生颤藻Oscillatorialimosa和杜氏 藻Dunaliella,其中,杜氏盐藻Dunaliellasalina是工业上生产β‑胡萝卜素的主要藻类物 种。此外,三孢布拉氏霉菌也被用于发酵生产β‑胡萝卜素,但无论是藻类还是三孢布拉氏霉 菌,均存在生产周期长,生产条件苛刻以及得率低等问题。近年来,大肠杆菌和解脂耶氏酵 母(Yarrowialipolytica)相继被改造用于异源生产β‑胡萝卜素。其中解脂耶氏酵母由于 胞内可以储存大量油脂,被认为是可以大量积累β‑胡萝卜素的理想宿主。但目前研究用于 生产β‑胡萝卜素的解脂耶氏酵母出发菌株均为YarrowialipolyticaPo1系列,而该系列 菌株积累胞内油脂的能力并不突出。因此,筛选和诱变获得能够积累较高胞内油脂的解脂
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