CN2023108532284解脂耶氏酵母基因工程菌及其在β-胡萝卜素生产中的应用.pdf

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN116656520A
(43)申请公布日2023.08.29
(21)申请号202310853228.4C12N15/55(2006.01)
(22)申请日2023.07.12C12P23/00(2006.01)
C12R1/645(2006.01)
(83)生物保藏信息

CCTCCNO：M202311832023.07.05

(71)申请人华东理工大学
地址200237上海市徐汇区梅陇路130号
(72)发明人花强刘枫陈骏
(74)专利代理机构南京理工大学专利中心
32203
专利代理师刘海霞
(51)Int.Cl.
C12N1/19(2006.01)
C12N15/81(2006.01)
C12N15/53(2006.01)
权利要求书1页说明书7页
C12N15/54(2006.01)
序列表（电子公布）附图3页
(54)发明名称
解脂耶氏酵母基因工程菌及其在β-胡萝卜
素生产中的应用
(57)摘要
本发明公开了一种解脂耶氏酵母基因工程
菌及其在β‑胡萝卜素生产中的应用。本发明从
自然界高含油脂的环境中分离筛选获得产胞内
油脂的野生型解脂耶氏酵母菌株，再以此为出发
菌株，经紫外诱变，获得一株胞内油脂合成能力
显著增强的突变株，然后将卷枝毛霉来源的
carB、carRP和解脂耶氏酵母内源的GGPPS表达盒
以多拷贝形式定点整合到突变株SBT的rDNA位
点，获得一株高拷贝且能生产β‑胡萝卜素的基
因工程菌SBT04‑015，最后对基因工程菌SBT04‑
015中的磷酸酶yl_PP基因进行定点敲除，获得能
够积累较高胞内油脂且高效生产β‑胡萝卜素的
解脂耶氏酵母基因工程菌SBT04‑016。
CN116656520A
CN116656520A权利要求书1/1页

1.解脂耶氏酵母基因工程菌SBT04‑016，保藏编号为CCTCCNO：M20231183。
2.权利要求1所述的解脂耶氏酵母基因工程菌SBT04‑016的培养方法，其特征在于，具
体步骤如下：
将解脂耶氏酵母基因工程菌SBT04‑016接种至发酵培养基中，所述的发酵培养基的碳
源为甘油或葡萄糖。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述的发酵培养基的组成为：葡萄糖
20g/L、酵母提取物20g/L、胰蛋白胨10g/L、pH5‑6，或为：甘油100g/L、酵母提取物20g/
L、胰蛋白胨10g/L、pH5‑6。
4.权利要求1所述的解脂耶氏酵母基因工程菌SBT04‑016在发酵生产β‑胡萝卜素中的
应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，具体应用方法为：将解脂耶氏酵母基因工
程菌SBT04‑016接种至发酵培养基中，发酵结束后，离心获取菌体，破碎细胞后利用丙酮萃
取β‑胡萝卜素。
6.提高解脂耶氏酵母类胡萝卜素产量的方法，其特征在于，定点敲除产类胡萝卜素的
解脂耶氏酵母中的yl_PP基因，所述的yl_PP基因的核苷酸序列如SEQNo.37所示。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，类胡萝卜素为β‑胡萝卜素、番茄红素、玉米
黄质、叶黄素、虾青素、西红花苷、角黄素或海胆酮。

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CN116656520A说明书1/7页

解脂耶氏酵母基因工程菌及其在β‑胡萝卜素生产中的应用

技术领域
[0001]本发明属于基因工程菌领域，涉及一种解脂耶氏酵母基因工程菌及其在β‑胡萝卜
素生产中的应用。

背景技术
[0002]β‑胡萝卜素是一种含有8个异戊二烯单元的四萜类化合物，是一种橘黄色的脂溶
性化合物，属于胡萝卜素或类胡萝卜素家族的一员，广泛存在于众多天然植物中，如红薯、
胡萝卜、木瓜、芒果等。β‑胡萝卜素不仅能作为人体合成维生素A的前体，而且对提高免疫
力、延缓衰老及抑制癌细胞的增殖等方面都有重要作用。藻类是目前生产β‑胡萝卜素的重
要来源之一，如佛氏绿胶藻Chloroglocafrisschi、泥生颤藻Oscillatorialimosa和杜氏
藻Dunaliella，其中，杜氏盐藻Dunaliellasalina是工业上生产β‑胡萝卜素的主要藻类物
种。此外，三孢布拉氏霉菌也被用于发酵生产β‑胡萝卜素，但无论是藻类还是三孢布拉氏霉
菌，均存在生产周期长，生产条件苛刻以及得率低等问题。近年来，大肠杆菌和解脂耶氏酵
母(Yarrowialipolytica)相继被改造用于异源生产β‑胡萝卜素。其中解脂耶氏酵母由于
胞内可以储存大量油脂，被认为是可以大量积累β‑胡萝卜素的理想宿主。但目前研究用于
生产β‑胡萝卜素的解脂耶氏酵母出发菌株均为YarrowialipolyticaPo1系列，而该系列
菌株积累胞内油脂的能力并不突出。因此，筛选和诱变获得能够积累较高胞内油脂的解脂