CN2023113573034一种检测HEK293细胞残留DNA的方法.pdf

(19)国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN117106863B
(45)授权公告日2023.12.19
(21)申请号202311357303.4(51)Int.Cl.
(22)申请日2023.10.19C12Q1/6851(2018.01)
C12Q1/6888(2018.01)
(65)同一申请的已公布的文献号C12N15/11(2006.01)
申请公布号CN117106863A
(56)对比文件
(43)申请公布日2023.11.24
豆敏华等.建立CAR-T细胞治疗产品质量控
(73)专利权人济南宜明医疗科技有限公司制检测方法及其定量参考品的数字PCR方法研
地址250000山东省济南市高新区东区街究《.中国新药杂志》.2021,第30卷(第24期),第
道大正路1777号药谷产业园生命科学2036-2314页.
城17号楼206室江燕等.DNA含量测定方法在生物制品安全
专利权人宜明（苏州）细胞生物科技有限公控制中的应用《.科技创新与应用》.2023,13卷
司(14期),第144-147页.
(72)发明人孙秀莲王志民蒋辉肖英杰审查员陈依晗

郑荣会
(74)专利代理机构北京惠森至诚知识产权代理
事务所(特殊普通合伙)

11992权利要求书1页说明书10页
专利代理师王园园序列表（电子公布）附图6页
(54)发明名称
一种检测HEK293细胞残留DNA的方法
(57)摘要
本发明提供一种检测HEK293细胞残留DNA的
方法，具体地，涉及一种qPCR扩增法测量HEK293
宿主细胞残留DNA的方法，其qPCR扩增过程中所
用上游引物序列为5'‑CGGGTTCACGCCATTCTCC‑
3'，其qPCR扩增过程中所用下游引物序列为5'‑
TAAAAATTAGCCGGGCGTAGTGG‑3'，qPCR扩增过程中
所用的探针序列为5'‑TGCCTCAGCCTCCCGAGT‑3'，
本方法测量残留DNA的定量限可以达到1fg，具
有高效、快速、准确、重复性好的优点。
CN117106863B
CN117106863B权利要求书1/1页

1.一种qPCR扩增法测量样品中HEK293细胞残留DNA的方法，其特征在于，所述qPCR扩增
所用特异性引物及探针如下所示：
HEK293qPCR上游引物：5'‑CGGGTTCACGCCATTCTCC‑3'；
HEK293qPCR下游引物：5'‑TAAAAATTAGCCGGGCGTAGTGG‑3'；
以及HEK293qPCR探针：5'‑TGCCTCAGCCTCCCGAGT‑3'。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述探针为包括荧光基团和荧光淬灭基团的单链
DNA探针，所述荧光基团为FAM，所述荧光淬灭基团为BHQ1。
3.根据权利要求1所述的方法，还包括在所述测量前采用磁珠法提取所述样品中的
DNA。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述qPCR扩增法的反应体系中的所述上游引物的
浓度为10μM，所述下游引物的浓度为10μM，所述探针的浓度为10μM。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述qPCR扩增法的反应体系为20μl，其组成为：

qPCRMIX10μl，上游引物0.4μl，下游引物0.4μl，探针0.2μl，DNA5μl，ddH2O4μ
l。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述qPCR扩增法的反应程序为37℃恒温2min，
95℃预变性5min，然后95℃10sec，60℃30sec，40个循环。
7.一种qPCR扩增法检测HEK293细胞残留DNA的试剂盒，所述试剂盒包括如下所示qPCR
扩增所用特异性引物及探针：
HEK293qPCR上游引物：5'‑CGGGTTCACGCCATTCTCC‑3'；
HEK293qPCR下游引物：5'‑TAAAAATTAGCCGGGCGTAGTGG‑3'；
以及HEK293qPCR探针：5'‑TGCCTCAGCCTCCCGAGT‑3'。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其中，所述上游引物的浓度为10μM，所述下游引物的
浓度为10μM，所述探针的浓度为10μM。

2
CN117106863B说明书1/10页

一种检测HEK293细胞残留DNA的方法

技术领域
[0001]本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种qPCR扩增法测量HEK293细胞残留DNA的
方法，以及相应的引物和探针。

背景技术
[0002]HEK293细胞即人胚胎肾细胞293(ATCCCRL‑1573)，其具有转染效率高、可悬浮培
养的特点，且HEK293细胞在培养体系中能够快速增长，实现高密度培养用于大规模表达，因
此被广泛的用于生产蛋白、疫苗、抗癌试剂及重组腺病毒包被等。宿主细胞残留DNA是指可
能出现于生物制品中的