2017103089843 ω‑转氨酶突变体及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN107058256B
(45)授权公告日2019.10.18
(21)申请号201710308984.3(56)对比文件
(22)申请日2017.05.04CN105441404A,2016.03.30,
CN105950581A,2016.09.21,
(65)同一申请的已公布的文献号CN103074309A,2013.05.01,
申请公布号CN107058256ACN105462949A,2016.04.06,
(43)申请公布日2017.08.18CN103103167A,2013.05.15,
(73)专利权人浙江科技学院Dong-FangXieetal..Constructionof
地址310023浙江省杭州市西湖区留和路stabilized(R)-selectiveamine
318号transaminasefromAspergillusterreusby
consensusmutagenesis《.Journalof
(72)发明人黄俊谢东芳方卉梅乐和Biotechnology》.2019,第293卷
王宏鹏胡升吕常江赵伟睿Birren,B.etal..conserved
(74)专利代理机构杭州天勤知识产权代理有限hypotheticalprotein[Aspergillusterreus
公司33224NIH2624]，NCBIReferenceSequence:XP_
代理人胡红娟001209325.1《.Genbank》.2008,
(51)Int.Cl.许伟等.定点突变技术在转氨酶改造中的应
C12N9/10(2006.01)用《.盐城工学院学报（自然科学版）》.2004,第17
C12N15/54(2006.01)卷(第4期),
C12N15/63(2006.01)审查员梁韶
C12P7/26(2006.01)
权利要求书1页说明书7页
序列表13页附图5页
(54)发明名称
ω-转氨酶突变体及其制备方法和应用
(57)摘要
本发明公开了ω-转氨酶突变体及其制备方
法和应用，属于分子生物学技术领域。ω-转氨酶
突变体的氨基酸序列如SEQIDNO.2或SEQID
NO.4或SEQIDNO.6或SEQIDNO.8或SEQID
NO.10或SEQIDNO.12所示。本发明还提供了编
码ω-转氨酶突变体的基因、包含该基因的表达
单元、重组质粒和转化子。本发明制备方法利用
NCBI数据库和BLAST软件比对筛选获得与ω-转
氨酶同源的氨基酸序列，通过Weblogo程序得到
序列一致性结果，并结合ω-转氨酶的序列确定
需要突变的氨基酸残基位点，通过定点突变技术
进行实验验证。该方法可有效地提高正突变概
率，提高实验效率及可行性，并筛选得到热力学
CN107058256B稳定性明显优于野生酶的突变酶。
CN107058256B权利要求书1/1页

1.ω-转氨酶突变体，其特征在于，氨基酸序列如SEQIDNO.2或SEQIDNO.4或SEQID
NO.6或SEQIDNO.8或SEQIDNO.10或SEQIDNO.12所示。
2.编码如权利要求1所述ω-转氨酶突变体的基因。
3.如权利要求2所述的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1或SEQ
IDNO.3或SEQIDNO.5或SEQIDNO.7或SEQIDNO.9或SEQIDNO.11所示。
4.一种包含权利要求2或3所述基因的表达单元。
5.一种包含权利要求4所述表达单元的重组质粒。
6.一种包含权利要求5所述重组质粒的转化子。
7.如权利要求1所述的ω-转氨酶突变体在催化(R)-(+)-α甲基苄胺生成苯乙酮中的应
用。

2
CN107058256B说明书1/7页

ω-转氨酶突变体及其制备方法和应用

技术领域
[0001]本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种ω-转氨酶突变体及其制备方法
和应用。

背景技术
[0002]手性胺是一类有重要价值的医药及精细化工中间体，对手性胺类化合物的不对称
合成进行深层次研究具有较大的经济效益和应用价值。目前，超过70％的药物都是手性胺
及其衍生物，如神经类药物、心血管药物、抗高血压药物、抗感染药物及疫苗等的合成都是
以手性胺作为中间体。
[0003]转氨酶既可以通过动力学拆分消旋胺，也能通过酮的不对称合成生成手性胺，比
传统化学催化方法更具有吸引力和竞争力，已成为工业上用于生产氨基酸、手性胺、氨基醇
和氨基糖等重要农药或医药中间体的常用酶之一。来自于土曲霉(Aspergillusterreus)
的ω-转氨酶以酮类化合物为原料，通过立体选择性地转氨基作用，可以高效生产手性胺，
催化氨基供体上的氨基转移到前手性