2017103671641 检测肽酰基精氨酸脱亚氨酶用生物传感器及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN107271511A
(43)申请公布日2017.10.20
(21)申请号201710367164.1
(22)申请日2017.05.23
(66)本国优先权数据
201611175431.72016.12.19CN
(71)申请人上海大学
地址200444上海市宝山区上大路99号
(72)发明人李根喜赵婧杨莉莉吕赟
(74)专利代理机构上海上大专利事务所(普通
合伙)31205
代理人顾勇华
(51)Int.Cl.
G01N27/327(2006.01)

权利要求书1页说明书4页
序列表1页附图4页
(54)发明名称
检测肽酰基精氨酸脱亚氨酶用生物传感器
及其制备方法和应用
(57)摘要
本发明涉及一种检测肽酰基精氨酸脱亚氨
酶用生物传感器及其制备方法和应用。该传感器
是在金电极表面修饰多肽链1(FGGGRGAC)，该
肽链C端的半胱氨酸的巯基通过金硫键把多肽链
1固定在电极表面，多肽链2(FGGGGC)功能化
银纳米颗粒通过多肽链2的半胱氨酸的巯基与银
纳米颗粒连接。在超分子葫芦脲8(CB[8])辅
助的主-客体相互作用帮助下，功能化的银纳米
颗粒由于CB[8]可以与多肽链1N端FGG和多肽链
2N端的FGG识别固定在电极表面。本发明的传感
器利用超分子化学辅助的信号标记方法提高该
实验的灵敏性，可以检测到PAD4的线性范围为
0.005nM至200nM，检测限为0.79nM，特异性也
特别强，可以有效地区分靶标与其他对照蛋白，
也可以做到在HL-60细胞裂解物中检测到内源性
PAD4的活性。
CN107271511A
CN107271511A权利要求书1/1页

1.一种肽酰基精氨酸脱亚氨酶检测用生物传感器，其特征在于该传感器是在金电极表
面上修饰一条多肽链1，在银纳米颗粒表面修饰多肽链2，通过葫芦脲[8]介导的超分子作用
可以结合芳香族氨基酸，即葫芦脲[8]结合多肽链1和多肽链2N末端的FGG，进而把两条多
肽链连接在电极上；所述的多肽链1序列为FGGGRGAC；多肽链2序列为FGGGGC。
2.一种制备根据权利要求1所述的肽酰基精氨酸脱亚氨酶检测用生物传感器的方法，
其特征在于该方法的具体步骤如下：将预处理过的金电极浸没在修饰电极的反应液中，4℃
反应16-18h，即得到肽酰基精氨酸脱亚氨酶检测用生物传感器；每100μL所述的修饰反应液
由50μL、10μM的多肽1、30μL、10mM的PBS和20μL、50mM的TCEP组成。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的金电极的预处理的方法为：将金电极
用砂纸和含有颗粒大小为1.0μm、0.3μm和0.05μm的铝粉的麂皮上打磨和抛光之后，将电极
分别在无水乙醇和超纯水中超声3min，然后用配置好的水虎鱼，即浓硫酸：过氧化氢=3:1的

体积比的混合液，每根电极滴50μL，净化金电极，去除残留的杂质；最后经过0.5M的H2SO4活
化。
4.一种肽酰基精氨酸脱亚氨酶的检测方法，采用三电极检测系统，其中饱和甘汞电极
作为参比电极，铂丝作为对电极，工作电极采用根据权利要求1所述的肽酰基精氨酸脱亚氨
酶检测用生物传感器，其特征在于该方法的具体步骤为：

a．每50μL反应体系中含有50mM的Tris-HCl、10mM的CaCl2、0.005nM～200nM的PAD4，pH=
7.6，将金电极浸没在该反应体系中，在37℃恒温温育2h；
b．把步骤a所得金电极浸没在200μL的10mg/ml的胰蛋白缓冲液溶液中，在37℃的条件

下反应1h；所述的胰蛋白酶的缓冲液配方为：50mM的Tris-HCl，20mM的CaCl2，pH8.4；
c．将步骤b所得的金电极浸没在5μM的葫芦脲8溶液中，室温反应1h；
d．将多肽链2修饰的银纳米颗粒在15000r，4℃，离心20min，去除未完全修饰上的多
肽，再用修饰多肽的缓冲溶液复溶，将上述电极浸没在复溶液中，反应2.5h；
e．通过三电极检测体系，采用线性扫描伏安法的电化学方法来表征银纳米颗粒的电化
学信号的响应。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的多肽链2修饰银纳米颗粒的方法为：
取1440uL的制备好的银纳米颗粒，加入60uL浓度为5uM多肽链2，在4℃的冰箱修饰16-18h。

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CN107271511A说明书1/4页

检测肽酰基精氨酸脱亚氨酶用生物传感器及其制备方法和
应用

技术领域
[0001]本发明涉及一种检测肽酰基精氨酸脱亚氨酶用生物传感器及其制备方法和应用。

背景技术
[0002]肽酰基精氨酸脱亚氨酶是钙离子依赖的翻译后的一种家族酶，可以催化肽酰基精
氨酸残基转变为肽酰基瓜氨酸残基。PAD异构体分别