2017103758768 用于检测竹鼠细小病毒的PCR引物及其试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN106987658B
(45)授权公告日2020.12.04
(21)申请号201710375876.8C12Q1/686(2018.01)
(22)申请日2017.05.24C12N15/11(2006.01)
(65)同一申请的已公布的文献号(56)对比文件
申请公布号CN106987658ACN102002539A,2011.04.06
CN104372018A,2015.02.25
(43)申请公布日2017.07.28饶丹等.大鼠细小病毒双重PCR检测方法的
(73)专利权人广西壮族自治区兽医研究所建立《.实验动物与比较医学》.2017,第37卷(第1
地址530001广西壮族自治区南宁市兴宁期),第32-35页.
区友爱北路51号韩文.基于宏基因组学的动物病毒侦测方法
(72)发明人吴健敏唐海波姜佳佳陈凤莲的建立《.中国优秀硕士学位论文全文数据库农
孟非白安斌覃绍敏刘金凤业科技辑》.2012,(第11期),第1-50页.
(74)专利代理机构广西南宁公平知识产权代理审查员徐丹
有限公司45104
代理人杨立华

(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书4页
C12Q1/70(2006.01)序列表4页附图2页
(54)发明名称
用于检测竹鼠细小病毒的PCR引物及其试剂
盒
(57)摘要
本发明公开了用于检测竹鼠细小病毒的PCR
引物，包括引物P1‑F和引物P1‑R，它们分别具有
序列表中SEQ.ID.No.1和SEQ.ID.No.2的碱基序
列。据此，发明人还制备了相应的PCR试剂盒并建
立相应的PCR检测方法，该试剂盒含有引物P1‑F
和引物P1‑R、DNA提取试剂、PCR扩增试剂、竹鼠细
小病毒阳性对照和阴性对照。实验表明，本发明
具有特异、敏感、快速、简便的特点，弥补了目前
临床上检测该病毒的技术空缺，可作为养殖场、
基层实验室等场所开展快速检测的良好方法。
CN106987658B
CN106987658B权利要求书1/1页

1.用于检测竹鼠细小病毒的PCR引物，其特征在于包括引物P1-F和引物P1-R，引物P1-F
和引物P1-R的摩尔比为1:1，它们分别具有以下碱基序列：
引物P1-F5′-GGCAGTCACACGTCACTAGC-3′，
引物P1-R5′-TTACTCTTTTATGCACCAACTC-3′。
2.一种用于检测竹鼠细小病毒的PCR试剂盒，其特征在于该试剂盒含有引物P1-F和引
物P1-R，它们分别具有以下碱基序列：
引物P1-F5′-GGCAGTCACACGTCACTAGC-3′，
引物P1-R5′-TTACTCTTTTATGCACCAACTC-3′。
3.根据权利要求2所述的用于检测竹鼠细小病毒的PCR试剂盒，其特征在于：所述引物
P1-F和引物P1-R的摩尔比为1:1。
4.根据权利要求3所述的用于检测竹鼠细小病毒的PCR试剂盒，其特征在于：所述引物
P1-F和引物P1-R的浓度均为20μM。
5.根据权利要求2所述的用于检测竹鼠细小病毒的PCR试剂盒，其特征在于该试剂盒还
含有以下试剂：DNA提取试剂、PCR扩增试剂、竹鼠细小病毒阳性对照和阴性对照。
6.根据权利要求5所述的用于检测竹鼠细小病毒的PCR试剂盒，其特征在于：所述DNA提
取试剂为AXYGEN体液病毒DNA/RNA小量试剂盒，PCR扩增试剂为2×EsTaqMasterMix。
7.根据权利要求5所述的用于检测竹鼠细小病毒的PCR试剂盒，其特征在于：所述竹鼠
细小病毒阳性对照为竹鼠细小病毒NS1蛋白基因片段cDNA的质粒，阴性对照为竹鼠细小病
毒阴性的昆明小鼠血清。

2
CN106987658B说明书1/4页

用于检测竹鼠细小病毒的PCR引物及其试剂盒

技术领域
[0001]本发明属于细小病毒检测技术领域，尤其涉及用于检测竹鼠细小病毒的PCR引物
及其试剂盒。

背景技术
[0002]细小病毒属于无囊膜单链DNA病毒，病毒基因组大约5kb。其主要成员包括猪细小
病毒、犬细小病毒、阿留申病毒、貂肠炎病毒、猫泛白细胞减少症病毒等。细小病毒是广泛的
病原体，在动物中会引起一系列的疾病。
[0003]申请人课题组前期的竹鼠病毒宏基因组学研究发现竹鼠细小病毒有很高的感染
率，并首次用细胞成功分离到三株竹鼠细小病毒，首次完成其全基因测序。目前申请人分离
到的竹鼠细小病毒是一种完全没有报道的新的细小病毒。该病毒粒子无囊膜，不含脂质和
糖类，结构坚实致密，对外界环境有强大的抵抗力。60℃加热30min不能使病毒完全灭活，在
50％的甘油生理盐水中能在普通冰箱4℃中最长可保存4个月，在25℃保存5d的含毒脏器，
病毒滴度不降低；在粪便和固体污