2018110158664抗PAX8蛋白单克隆抗体及其用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN109021101A
(43)申请公布日2018.12.18
(21)申请号201811015866.4

(22)申请日2018.09.01
(83)生物保藏信息
CGMCCNo.155912018.04.26
(71)申请人无锡傲锐东源生物科技有限公司
地址214092江苏省无锡市滨湖区马山梅
梁路168号
(72)发明人何为无马东晖魏海涛叶露
张乾坤扈晓敏王成林任琪
钮倩
(51)Int.Cl.
C07K16/18(2006.01)
C12N5/20(2006.01)
G01N33/577(2006.01)
G01N33/574(2006.01)权利要求书1页说明书4页
序列表2页附图3页
(54)发明名称
抗PAX8蛋白单克隆抗体及其用途
(57)摘要
本发明涉及生物技术领域，公开了一种杂交
瘤细胞株(保藏编号为CGMCCNo.15591)，以及由
此杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体OTI6H8。本发
明还涉及单克隆抗体OTI6H8在制备用于检测
PAX8蛋白的免疫检测工具中的应用，含单克隆抗
体OTI6H8的免疫组化试剂盒，以及单克隆抗体
OTI6H8在制备用于标记肿瘤的试剂盒中的应用。
本发明所述单克隆抗体可与PAX8蛋白特异性结
合，而与细胞内其他蛋白无交叉反应，显著提高
了PAX8蛋白免疫检测的特异性、准确性和可靠
性。
CN109021101A
CN109021101A权利要求书1/1页

1.一种单克隆抗体，其特征在于，其与配对盒子基因-8(Pairedboxgene8，PAX8)特
异性结合；
所述单克隆抗体由杂交瘤细胞株OTI6H8产生，保藏编号为CGMCCNo.15591。
2.如权利要求1所述的单克隆抗体在制备用于区分组织淋巴管内皮与血管内皮的免疫
检测工具中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，所述免疫检测工具为试剂、试剂盒、芯片或试纸。
4.一种免疫组化检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的单克隆抗体。
5.如权利要求1所述的单克隆抗体在制备用于标记组织细胞的试剂盒中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，所述组织细胞为卵巢癌，甲状腺癌组织。

2
CN109021101A说明书1/4页

抗PAX8蛋白单克隆抗体及其用途

技术领域
[0001]本发明涉及肿瘤学和医学领域，具体涉及可特异结合PAX8蛋白的单克隆抗体
OTI6H8、产生所述单克隆抗体的细胞株及应用该抗体用于肿瘤来源鉴定的方法和用途。

背景技术
[0002]配对盒子基因-8(Pairedboxgene8，PAX8)是甲状腺、泌尿生殖道、肾脏等器官
发育过程中重要的转录调节因子，其在甲状腺，肾脏等组织中组成型表达，在正常卵巢的上
皮细胞不表达。但是在卵巢内膜样癌和透明细胞癌中呈核染阳性，而在粘膜性卵巢癌，乳腺
以及其它非妇科的原发性肿瘤中几乎不表达。PAX8的这些表达特点为其临床应用奠定了基
础。目前临床上常用免疫组织化学(IHC)病理实验检测肿瘤细胞中蛋白的表达状况，然而
IHC实验的核心为特异性结合蛋白的单克隆抗体，其性能的优劣直接决定着整个检测的灵
敏度和特异性。因此，研制出一种结合特异性较高的针对PAX8蛋白的单克隆抗体对IHC检测
PAX8表达水平具有重要的意义。

发明内容
[0003]有鉴于此，本发明的目的在于提供一种结合特异性较高的PAX8蛋白的单克隆抗
体，及其在制备用于检测PAX8蛋白的免疫检测工具中的应用。
[0004]本发明提供了一种杂交瘤细胞株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微
生物中心(简称为CGMCC)，保藏日期为2018年4月26日，保藏编号为CGMCCNo.15591。
[0005]本发明还提供了一种特异性结合PAX8蛋白的单克隆抗体OTI6H8，由上述杂交瘤细
胞株产生。
[0006]本发明所述单克隆抗体的制备方法如下：
[0007](1)重组表达载体的构建：根据PAX8ORF核苷酸序列(PAX8ORF核苷酸序列如SEQID
NO.1所示，714bp；PAX8氨基酸序列如SEQIDNO.2所示)
[0008]设计引物PCR扩增PAX8ORF第898bp位到第1350bp位序列，基因两侧分别引入限制
性内切酶位点SgfI和MluI，插入表达载体pET23-N-His，构建PAX8氨基酸序列第300位到第
450位的重组表达质粒pET23a-rPAX8；上游扩增引物序列，SEQIDNO.3:CACGCGATCGCG
GATCCTCACTCACCCTTC下游扩增引物序列SEQIDNO.4:ACCGACGCGTCTA
CAGATGGTCAAAGGCCG
[0009](2)PAX8重组蛋白的表达与纯化：