2018115494394一种重组人脑利钠肽包涵体高效率复性方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN109400694A
(43)申请公布日2019.03.01
(21)申请号201811549439.4
(22)申请日2018.12.18
(71)申请人西藏诺迪康药业股份有限公司
地址850000西藏自治区拉萨市北京中路
93号
(72)发明人任东升刘银花张艳何晨
(74)专利代理机构成都坤伦厚朴专利代理事务
所(普通合伙)51247
代理人李红灵
(51)Int.Cl.
C07K14/58(2006.01)
C07K1/14(2006.01)

权利要求书1页说明书5页
(54)发明名称
一种重组人脑利钠肽包涵体高效率复性方
法
(57)摘要
本发明提供了一种重组人脑利钠肽包涵体
蛋白复性方法，它包括如下步骤：(1)洗涤包涵
体：取重组人脑利钠肽的原核表达包涵体，加入
含2mol/L尿素的缓冲液洗涤；(2)溶解包涵体：加
入溶解缓冲液，搅拌4小时，离心，得上清液；(3)
在步骤(2)所得上清液中加入复性缓冲液，4℃下
复性，离心，获得上清液，即可。本发明还提供了
一种重组人脑利钠肽的制备方法。本发明提供的
复性方法，可以有效提高重组人脑利钠肽复性效
率，操作简单、成本低，应用前景良好。
CN109400694A
CN109400694A权利要求书1/1页

1.一种重组人脑利钠肽包涵体蛋白复性方法，其特征在于：它包括如下步骤：
(1)洗涤包涵体：取重组人脑利钠肽的原核表达包涵体，加入含2mol/L尿素的缓冲液洗
涤；
(2)溶解包涵体：加入溶解缓冲液，搅拌4小时，离心，得上清液；
其中，所述溶解缓冲液包括如下配比的组分：Tris-HCl50mmol/L，氯化钠150mmol/L，
8mol/L尿素，pH8.0；
(3)在步骤(2)所得上清液中加入复性缓冲液，4℃下复性，离心，获得上清液，即可；
其中，所述复性缓冲液包括如下配比的组分：
Tris-HCl50mmol/L，氯化钠150mmol/L，L-精氨酸0.3～1mol/L，还原型谷胱甘肽1.5～
2.5mmol/L，氧化型谷胱甘肽0.1～0.5mmol/L，pH8.0。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，在包涵体洗涤前，先加入溶液
重悬、离心；
所述重悬溶液包括如下配比的组分：Tris-HCl50mmol/L，氯化钠150mmol/L，pH8.0。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述缓冲液包括如下配比
的组分：Tris-HCl50mmol/L，氯化钠150mmol/L，2mol/L尿素，pH8.0；
所述洗涤的方法为：加入缓冲液后重悬、离心取沉淀，即得。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，溶解缓冲液的加入量为：每克
包涵体湿重对应溶解缓冲液5ml。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述复性缓冲液包括如下配比
的组分：
Tris-HCl50mmol/L，氯化钠150mmol/L，L-精氨酸0.5mol/L，还原型谷胱甘肽2mmol/L，
氧化型谷胱甘肽0.2mmol/L，pH8.0；
或，
Tris-HCl50mmol/L，氯化钠150mmol/L，L-精氨酸1mol/L，还原型谷胱甘肽2mmol/L，氧
化型谷胱甘肽0.2mmol/L，pH8.0。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，
复性缓冲液的加入量为上清液的3倍体积；
和/或，复性缓冲液为搅拌加入，加入速度为0.4～0.6倍体积上清液/小时。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，加入速度为0.5倍体积上清液/
小时。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，4℃复性的时间为24h；离心的
方法为：8000rpm、4℃离心30分钟。
9.权利要求1-8任意一项方法获得的重组人脑利钠肽蛋白产物。
10.一种重组人脑利钠肽的制备方法，其特征在于：按照权利要求1-8任意一项所述的
方法对重组人脑利钠肽包涵体蛋白复性后，纯化，即可。

2
CN109400694A说明书1/5页

一种重组人脑利钠肽包涵体高效率复性方法

技术领域
[0001]本发明属于蛋白纯化技术领域，具体涉及一种重组人脑利钠肽包涵体蛋白的高效
率复性方法。

背景技术
[0002]脑利钠肽(BrainNatriureticPeptide，BNP)，又名脑钠素，是日本学者Sodoh等
在1988年首次发现的一种利钠尿肽家族激素，主要由心脏分泌，具有利钠、利尿、舒张血管
和降低血压等生理功能，在维持细胞渗透压、机体水盐代谢平衡和血压稳定等方面发挥重
要作用，具有良好的药用开发价值。
[0003]由于天然来源