2019110957430检测尿液中儿茶酚胺及其代谢物的方法,试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN112782328A
(43)申请公布日2021.05.11
(21)申请号201911095743.0
(22)申请日2019.11.11
(71)申请人深圳华大临床检验中心
地址518083广东省深圳市盐田区盐田街
道北山工业区11栋1、3、4、5楼
(72)发明人鲁靖睿廖云莉饶维桥任艳
訾金林梁
(74)专利代理机构深圳鼎合诚知识产权代理有
限公司44281
代理人李小焦彭家恩
(51)Int.Cl.
G01N30/88(2006.01)

权利要求书3页说明书12页附图1页
(54)发明名称
检测尿液中儿茶酚胺及其代谢物的方法、试
剂盒及其应用
(57)摘要
本申请公开了一种检测尿液中儿茶酚胺及
其代谢物的方法、试剂盒及其应用。本申请的检
测方法包括对待测尿液样品依序进行预处理、样
本处理和固相萃取，然后对固相萃取产物进行液
相色谱串联质谱法检测，实现五种儿茶酚胺及其
代谢物同时检测；样本预处理包括避光取待测尿
液样品，向其中加酸进行酸化处理，并加稳定剂
和抗氧化剂；样本处理包括向预处理产物中加入
含有内标的样本稀释液；固相萃取包括对样本处
理产物进行过柱、淋洗和洗脱，获得用于检测的
固相萃取产物。本申请的方法和试剂盒，仅需少
量尿液就可一次性定量检测五种儿茶酚胺及其
代谢物，简单快捷，节省了操作时间，为嗜铬细胞
瘤或其相关肿瘤筛查、评估提供了更为准确和完
整的参考依据。
CN112782328A
CN112782328A权利要求书1/3页

1.一种检测尿液中儿茶酚胺及其代谢物的方法，其特征在于：包括对待测尿液样品依
序进行预处理、样本处理和固相萃取，然后对固相萃取的产物进行液相色谱串联质谱法检
测，实现同时检测待测尿液样品中的多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素、去甲变肾上腺素和
变肾上腺素；
所述预处理包括避光取待测尿液样品，向其中加入酸进行酸化处理，加入稳定剂和抗
氧化剂以保证待测尿液样品的稳定性；
所述样本处理包括向所述预处理的产物中加入含有内标的样本稀释液，混合均匀，备
用；
所述固相萃取包括对所述样本处理的产物进行过柱、淋洗和洗脱，获得固相萃取产物，
所述固相萃取的固相萃取柱采用全能型亲水亲脂平衡的水可浸润性反相吸附剂；
所述样本稀释液为含有乙二胺四乙酸和2-氨基乙基二苯基硼酸酯的氯化铵-氨水溶
液；
所述内标包括多巴胺-D4、去甲肾上腺素-D6、肾上腺素-D6、去甲变肾上腺素-D3和变肾
上腺素-D3。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述预处理中，酸化处理加入的酸为乙酸

和/或柠檬酸二氢钠，所述稳定剂为乙二胺四乙酸，所述抗氧化剂为Na2S2O3；
优选的，所述酸化处理中，待测尿液样品与乙酸的体积比为10:0.08；

优选的，所述预处理中，乙二胺四乙酸和Na2S2O3的工作浓度都为0.25mg/mL。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述固相萃取还包括，在对所述样本处理
的产物进行过柱之前，对固相萃取柱进行活化；
优选的，所述活化采用的试剂为甲醇和WashBuffer，所述WashBuffer为0.2mol/L的
氯化铵-氨水缓冲液；
优选的，所述活化具体包括，向固相萃取柱中加入甲醇，自然流干，然后再加入氯化铵-
氨水缓冲液，自然流干，即完成固相萃取柱的活化。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：对所述样本处理的产物进行过柱、淋洗，具
体包括，将所述样本处理的产物加入固相萃取柱中，自然流干，再进行淋洗；
优选的，所述淋洗包括分别采用淋洗液1和淋洗液2对固相萃取柱进行淋洗；
所述淋洗液1为含20％甲醇的0.2mol/L氯化铵-氨水缓冲液；
所述淋洗液2为0.01％氨水溶液；
优选的，所述淋洗具体包括，向固相萃取柱中加入淋洗液1，自然流干，然后再加入淋洗
液2，再自然流干，即完成淋洗。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述固相萃取中，所述洗脱包括采用所述
待测尿液样品5倍体积的洗脱液对固相萃取柱进行洗脱；
所述洗脱液为含2％甲酸的水溶液；
优选的，所述洗脱具体包括，向固相萃取柱中加入洗脱液，自然流干，然后使用正压仪
将其压干。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于：所述液相色谱串联质谱法中，流
动相包括流动相A和流动相B；
流动相A由去离子水、流动相添加剂A和流动相添加剂B按体积比1000:1:0.4混合而成；

2
CN112782328A权利要求书2/3页
流动相B由甲醇、流动相添加剂A和流动相添加剂B按体积比1000:1:0.4混合而成；
所述流动相添加剂A为甲酸，所述流动相添加剂B为5mol/L的乙酸铵溶液；
优选的，所述液相色谱串联质谱法中，按照表1所示的