




如果您无法下载资料,请参考说明:
1、部分资料下载需要金币,请确保您的账户上有足够的金币
2、已购买过的文档,再次下载不重复扣费
3、资料包下载后请先用软件解压,在使用对应软件打开
(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号CN111500677A (43)申请公布日2020.08.07 (21)申请号202010419473.0 (22)申请日2020.05.18 (71)申请人浙江树人学院(浙江树人大学) 地址312000浙江省杭州市树人街8号 申请人树兰(杭州)医院有限公司 浙江默乐生物科技有限公司 (72)发明人蒋国平麻锦程曾丽贾俊玲 (74)专利代理机构北京慕达星云知识产权代理 事务所(特殊普通合伙) 11465 代理人崔自京 (51)Int.Cl. C12Q1/6806(2018.01) C12N15/10(2006.01) C12Q1/6886(2018.01) 权利要求书1页说明书3页附图1页 (54)发明名称 一种核酸助沉剂及改良的循环肿瘤DNA的提 取方法 (57)摘要 本发明公开了一种核酸助沉剂及改良的循 环肿瘤DNA的提取方法,属于生物技术领域。本发 明公开的核酸助沉剂,由CarrierRNA、Acryl Carrier、PolyA、糖原中的至少一种与醋酸钠组 合而成。本发明公开的改良的循环肿瘤DNA的提 取方法,通过在血浆样本中添加助沉剂,以提高 样本中游离DNA的检测得率。本发明在提高样本 中游离DNA提取得率的同时,提高了对肿瘤突变 基因的检出率,有助于临床对肿瘤诊断的辅助作 用。 CN111500677A CN111500677A权利要求书1/1页 1.一种核酸助沉剂,用于循环肿瘤DNA提取,其特征在于,由0.5-1.5μg/μlCarrier RNA、l-3μg/μlAcrylCarrier、1-5μg/μlPolyA、2-6μg/μl糖原中的至少一种与0.1- 0.6mol/μl醋酸钠组合而成。 2.根据权利要求1所述的一种核酸助沉剂,其特征在于,由1.0μg/μlCarrierRNA、3μg/ μl糖原和0.2mol/μl醋酸钠组合而成。 3.根据权利要求1所述的一种核酸助沉剂,其特征在于,由1.5μg/μlAcrylCarrier、 4.0μg/μlPolyA和0.3mol/μl醋酸钠组合而成。 4.一种改良的循环肿瘤DNA的提取方法,其特征在于,具体步骤如下: (1)分离血浆样本; (2)向步骤(1)分离的血浆样本中加入权利要求1-3任一项所述的核酸助沉剂,再加入 200μLProteinaseK,按照磁珠法游离DNA试剂盒进行游离DNA的提取; (3)将步骤(2)提取到的游离DNA进行PCR检测。 2 CN111500677A说明书1/3页 一种核酸助沉剂及改良的循环肿瘤DNA的提取方法 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域,更具体的说是涉及一种核酸助沉剂及改良的循环肿瘤 DNA的提取方法。 背景技术 [0002]循环肿瘤基因(ctDNA),是一种无细胞状态的胞外DNA,来源于死亡肿瘤细胞的体 细胞突变DNA片段,存在于血液、滑膜液和脑脊液等体液中,为游离DNA。它是一种具备广泛 应用前景、高敏感性、高特异性的肿瘤标志物,在肿瘤的诊断、治疗及预后检测等方面发挥 重要作用,可应用于肿瘤的液态活检,进行肿瘤的早期筛查诊断。而ctDNA的含量非常低,因 此ctDNA的高效提取成为肿瘤液态活检技术的关键之一,提高ctDNA的提取率可以提高 ctDNA突变的检出率,从而提高肿瘤早期筛查的准确率。 [0003]核酸分离与纯化的方法一般包括细胞裂解、酶处理、核酸与其他生物大分子物质 分离、核酸纯化等几个主要步骤。核酸的分离和纯化是关键步骤,核酸的高电荷磷酸骨架使 其比蛋白质、多糖、脂肪等其他生物大分子物质更具亲水性,根据它们理化性质的差异,用 选择性沉淀、层析、密度梯度离心等方法可将核酸分离、纯化。不同方法得到的核酸提取效 果不一样。 [0004]对于游离DNA(cfDNA)的分离纯化方法主要为酚-氯仿法、硅胶膜吸附柱法和磁珠 法。传统的酚-氯仿法提取效率低、重复性差,且有毒溶剂用量多,操作复杂,容易发生污染。 硅胶膜吸附柱法是结合特定的缓冲溶液、精确的pH和盐浓度实现对核酸的吸附。该方法快 速、核酸纯度高、重现性好,其主要缺点是对小片段核酸的提取效率较磁珠法低,且常用离 液盐条件,对后续的盐分洗涤比较繁琐、冗长。柱提法还存在的一个严重的问题是高速离心 造成的剪切力,容易降解DNA,影响DNA的完整性。目前市场上主要的硅胶膜吸附柱法提取游 离核酸的产品是Qiagen公司的试剂盒,不但价格较昂贵,而且回收率仅约40%。磁珠法核酸 纯化技术采用了纳米级磁珠微珠,这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团,能同核酸发生 吸附反应。磁珠提取技术可用于多种样本的批量处理,是自动化、高通量的最佳选择之一, 且操作简便,耗时短,但是市
Ta的资源

2020110359336低致栓颅内血管编织支架及其处理方法

2020110303186一种钙钛矿量子点聚合物粒子的制备方法

2020110124078基于精准医疗的大数据分析系统及方法

2020109651910 应用近红外谷物分析仪建立油莎豆中粗脂肪含量的检测方法

2020109529321一种铝合金用无氟无氯环保粒状精炼剂及其制备和应用

2020108899336一种新能源商用车总装车间线路布局

2020108620703城市燃气管网多输差协同计算模型及应用方法

2020108207369一种微交联阳离子型聚丙烯酰胺絮凝剂及其制备方法与应用

2020108035131一种基于全站仪的激光雷达外部参数标定方法

2020107682859一种内燃机等离子节油器阴阳极的制备方法

13****40
实名认证
内容提供者


最近下载