发明授权-2018103058197-构建B2m定点敲入人B2M cDNA小鼠模型的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN110343698B
(45)授权公告日2021.03.30
(21)申请号201810305819.7A01K67/027(2006.01)
(22)申请日2018.04.08A61K49/00(2006.01)
(65)同一申请的已公布的文献号(56)对比文件
申请公布号CN110343698ACN102899327A,2013.01.30
KarenL.Mossman等.HerpesSimplex
(43)申请公布日2019.10.18VirusTriggersandThenDisarmsaHost
(73)专利权人清华大学深圳研究生院AntiviralResponse.《JournalofVirology》
地址518055广东省深圳市南山区西丽大.2001,第75卷(第2期),750-758.
学城清华园区BenxiaHu等.Functionalpredictionof
专利权人苏州吉玛基因股份有限公司differentiallyexpressedlncRNAsinHSV-1
(72)发明人张雅鸥王子强王松茂许乃寒infectedhumanforeskinfibroblasts.
logyJournal》.2016,第13卷1-12.
张佩琢谢伟东张世宽《Viro
YunhaoMao等.TheRolesofNon-coding
(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限RNAinHSVInfection.《Virology&
公司11245RetrovirologyJournal》.2019,第2卷(第1期),
代理人关畅张立娜1-7.
(51)Int.Cl.审查员韩沛
C12N15/113(2010.01)

C12N15/90(2006.01)权利要求书1页说明书7页
序列表6页附图9页
(54)发明名称
构建B2m定点敲入人B2McDNA小鼠模型的方
法
(57)摘要
本发明公开了一种构建B2m定点敲入人B2M
cDNA小鼠模型的方法。该方法包括如下步骤：利
用CRISPR/Cas9技术在目的小鼠的基因组中B2m
基因的起始密码子处定点敲入缺失起始密码子
ATG的人源B2McDNA。将Cas9mRNA、gRNA和同源重
组载体(包含2kb5’同源臂、HumanB2McDNA‑3
×polyA和2kb3’同源臂)显微注射到C57BL/6J
小鼠的受精卵中，进而获得相应的小鼠模型。人
源B2McDNA小鼠对HSV‑1病毒或其它疱疹类DNA
病毒易感，可用作动物模型筛查抗病毒药物或研
究病毒与宿主相互作用的机理。
CN110343698B
CN110343698B权利要求书1/1页

1.一种构建B2m定点敲入人源B2McDNA的小鼠模型的方法，包括如下步骤：利用
CRISPR/Cas9技术在目的小鼠的基因组中B2m基因的起始密码子处定点敲入缺失起始密码
子ATG的人源B2McDNA；
在所述方法中，作为定点敲入工具的同源重组载体上含有如下DNA片段A；所述DNA片段
A自上游到下游依次包含5’同源臂、缺失起始密码子ATG的人源B2McDNA、3个连续的polyA、
3’同源臂；所述5’同源臂为位于所述目的小鼠的基因组中B2m基因的起始密码子上游的2kb
序列；所述3’同源臂为位于所述目的小鼠的基因组中B2m基因的起始密码子下游的2kb序
列。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在所述方法中，作为被Cas9核酸酶切割的

靶序列是所述目的小鼠的基因组中B2m基因中符合5’‑NX‑NGG‑3’或5’‑CCN‑NX‑3’序列排列

规则的片段；N表示A、G、C和T中的任一种，14≤X≤30，且X为整数，NX表示X个连续的脱氧核
糖核苷酸。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述靶序列为SEQIDNo.1或SEQID
No.2。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述5’同源臂的序列为SEQIDNo.3的第
1‑2000位；所述缺失起始密码子ATG的人源B2McDNA的序列为SEQIDNo.3的第2001‑2984
位；所述3个连续的polyA的序列为SEQIDNo.3的第3008‑3758位；所述3’同源臂的序列为
SEQIDNo.3的第3781‑5780位。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述DNA片段A的序列为SEQIDNo.3。
6.根据权利要求1‑5中任一所述方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
(1)将Cas9mRNA、gRNA和权利要求1‑5任一中所述的同源重组载体注射到所述目的小
鼠的受精卵胞质中，得到F0代小鼠；
所述gRNA的序列为将SEQIDNo.1或SEQIDNo.2中的T替